搖瓶液體菌種制作工藝

2014年12月11日22:44:42 2 38,411

一 液體培養基配方:葡萄糖 20克? 蛋白胨 10克? 硫酸鎂 0.5克? 硫酸二氫鉀 1克? 水 1000ml

二 液體培養基的制作步驟 :

1 稱量 溶解:按配方稱量藥品,將藥品置于燒杯中加水,玻璃棒攪勻。

2 分裝:分裝三角瓶時避免培養液黏住瓶壁口,用漏斗進行分裝,三角瓶裝料系數60%。

3 加棉塞:棉塞大小,松緊度要適中,一般塞入3-4厘米。

4 裝鍋滅菌:塞好棉塞的三角瓶用雙層報紙包扎好,裝入滅菌鍋,蓋上報紙,排氣后,待溫度升至121℃開始計時,溫度控制在121—123℃,維持50min。

5 烘棉塞:當壓力降至0.05MPa時帶壓進入無菌室,當壓力即將降至零時開始放氣,打開鍋蓋拿出報紙,將鍋蓋嵌一小縫,以此來烘干棉塞, 維持40—50min。

6 冷卻:取出三角瓶放在超凈工作臺或接種箱中,冷卻后進行接種。

三 接種工藝 :

A 母種為試管菌種的接種工藝

1 選取新培養好的試管斜面菌種1支(若從冰箱中取出需提前24小時活化),松動三角瓶的棉塞,以備接種方便,在酒精燈火焰旁將棉塞順時針旋轉松動,放在一旁,拿起接種鉤在火焰上燒紅,并慢慢傾斜灼燒,接種時伸入試管瓊脂下部,快速冷卻,除去菌種前端菌絲和氣生菌絲。

2 右手拔出三角瓶棉塞握在手里,用接種鉤挑取斜面的50%切成4×4mm的接種塊5-6塊,迅速放入三角瓶中。

3 試管菌種迅速放回酒精燈旁,接種鉤也放回試管中,棉塞再次塞入時要經過灼燒。

4 取雙層報紙包扎好瓶口,在三角瓶上貼好標簽,注明菌種明稱,培養基配方,接種日期,然后放到搖床上進行培養。

5 清潔超凈工作臺。

B 母種為平皿菌種的接種工藝

1 選取新培養好的平板菌種一個(若從冰箱中取出需提前24小時活化),松動三角瓶的棉塞,以備接種方便,在酒精燈火焰旁將棉塞順時針旋轉松動,放在一旁,而后在酒精燈旁將平板封口膜撕掉,拿起接種鉤在火焰上燒紅,并慢慢傾斜灼燒,接種時將平皿蓋打開放在一旁,在平板菌種上進行劃線(中間接種塊不納入接種部分)平均接種塊為0.5*0.5cm,劃線后接種鉤暫放在試管架上。

2 右手拔出三角瓶棉塞握在手里,用接種鉤挑取4-5塊接種塊,迅速放入三角瓶中。

3平板菌種迅速放回酒精燈旁,接種鉤也放回平皿中,棉塞再次塞入時要經過灼燒。

4 取雙層報紙包扎好瓶口,在三角瓶上貼好標簽,注明菌種明稱,培養基配方,接種日期,然后放到搖床上進行培養。

5 清潔超凈工作臺。

四 液體菌種的培養:

1 三角瓶置于搖床上或者磁力攪拌器上進行培養,溫度控制在23—24℃,轉速或頻率逐漸升高。

2 定時觀察培養液顏色,菌球形態,如發現異常立即進行鑒定(測ph,鏡檢菌絲,取樣培養)。

3 菌齡一般控制在6—8天,此時培養液內出現大量菌球,培養液呈黃白色,帶有蘋果酸味道。

4 將培養好的液體種子進行綜合檢測后供給發酵罐進行接種,待發酵罐接種后同時對液體種子進行鏡檢、空培養、取樣。

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評論:2   其中:訪客  2   博主  0
    • 夏洛源 夏洛源 0

      您好,想請問一下,斜面試管菌種從冰箱里拿出來怎么進行活化呢?

        • 菇行天下 菇行天下

          @ 夏洛源 恢復到該品種的培養溫度即可